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----  诚心求教提高酶稳定性问题  (http://bbs.xml.org.cn/dispbbs.asp?boardid=46&rootid=&id=48442)


--  作者:x_d1984
--  发布时间:6/12/2007 10:21:00 PM

--  诚心求教提高酶稳定性问题
一种氨基酸水解酶,对热和氧不稳定,催化中心由Glu、Lys、Cys构成,Cys为底物结合中心,四聚体;
    有同种酶(氨基酸序列与我研究的酶的同源性在97%左右)的晶体结构已测定;
    目前,大多文献给出的方法是定向进化和随机突变筛选,改变部分氨基酸提高稳定性;

    我的想法是,希望能根据现有的DNA序列,进行同源建模,然后能通过信息学方法改变部分氨基酸,计算或说明改变哪些氨基酸后能更稳定,然后指导生物学试验,去改变氨基酸验证提高稳定性。

    问题在于,怎么了解空间结构与稳定性的关系,我仅仅拿个空间三维结构也看不出具体的东西啊。就是同源建模后,我想提高热稳定性,可能会想到改变部分氨基酸构成二硫键或盐桥等等;提高氧化稳定性,可能改变部分部分还原性强的氨基酸。但是该怎么去做,总不能去试、去猜改变什么地方;该怎么有个整体的把握和做法去通过生物信息学里的理论工具来实现;

    简单说就是:怎么样能够用信息学的东西给我一个结论,在理论上改变那些氨基酸会使酶的热稳定性及氧化稳定性提高,并且还能与酰胺氨基酸结合催化,保持或提高水解活性。

    我也看了一些生物信息学方面的书,但都是泛泛而谈,我也不知如何下手,具体怎么去做,希望各位师兄师姐多多帮忙,领我入门,诚心求教,感谢大家。望大家能给我一个整体脉络,详细讲述怎么去做并涉及什么软件、方法等等,如果有相似的论文和书籍,希望给我推荐,能通过实例参考。

    花了很长时间,都很笼统,不知实际做法,希望大家帮忙,再次谢谢了


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